PKC lambda/iota Lentiviral Activation Particles (m): sc-422263-LAC

Das Mausgen **Prkci** kodiert die atypische Protein-Kinase C Lambda/Iota (PKCλ/ι), eine Serin/Threonin-Kinase, die als zentrale Komponente des PAR-Polarisationskomplexes an der Etablierung der apikal-basolateralen Polarität beteiligt ist und die asymmetrische Zellteilung koordiniert. PKCλ/ι integriert Signale aus PI3K- und durch kleine GTPasen regulierten Signalwegen, um die Organisation des Zytoskeletts, den Vesikeltransport und den Aufbau von Tight Junctions zu steuern und so Epithelarchitektur und Barrierefunktion zu prägen. Über eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle von Transkriptionsprogrammen und Zellzyklusregulatoren beeinflusst Prkci Proliferation, Differenzierung und Überleben in kontextabhängiger Weise. Eine Fehlregulation von Polarität und atypischer PKC-Signalgebung wird mit veränderter Gewebehomöostase und onkogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Prkci einen geeigneten Ansatzpunkt darstellt, um in Mausmodellen Mechanismen der Transformation, Invasion und Entwicklungsdefekte zu untersuchen.

PKC lambda/iota Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Prkci-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PKC lambda/iota Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Prkci-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PKC lambda/iota-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Prkci-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.