PKC gamma Double Nickaseプラスミド (h): sc-400503-NIC

PRKCGはプロテインキナーゼCガンマ（PKCγ）をコードしており、PKCγは神経細胞に豊富に発現する、Ca2+およびジアシルグリセロールによって活性化されるセリン／スレオニンキナーゼである。PKCγは膜シグナル伝達を、リン酸化依存的な興奮性およびシナプス機能の制御へと結び付ける。PKCγはホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達からの上流入力を統合し、MAPK/ERKなどのキナーゼカスケードと交差する経路を介して、細胞骨格リモデリング、小胞輸送、活動依存的転写を調節する。ヒト組織ではPRKCGは中枢神経系で高発現しており、PKCγシグナルの異常やコード領域の変異は、神経変性および神経発達に関わる表現型と関連づけられている。PRKCGの実験的な摂動は、神経可塑性、ネットワーク活動、リン酸化によって駆動されるプロテオーム変化を制御するシグナル伝達機構を解明するために一般的に用いられる。

PKC gamma ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRKCG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRKCG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRKCGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRKCGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。