Plásmido CRISPR de Activación (h) PKC eta: sc-402297-ACT

PRKCH codifica la proteína quinasa C eta (PKCη), una nueva quinasa de serina/treonina de la familia PKC que se activa aguas abajo de la señalización dependiente de diacilglicerol y se integra con vías mediadas por fosfolípidos. PKCη contribuye a la regulación de la diferenciación de queratinocitos, el control del crecimiento de células epiteliales, la remodelación del citoesqueleto y la señalización en respuesta al estrés, con funciones dependientes del contexto en programas transcripcionales vinculados a MAPK y NF-κB. En tejidos inmunitarios y de barrera, la actividad de PRKCH influye en los estados de activación celular y en las salidas de señalización inflamatoria, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de fenotipos asociados a proliferación, diferenciación e inflamación desreguladas. La expresión o la señalización alteradas de PRKCH se han investigado en la biología de enfermedades en las que el equilibrio de las isoformas de PKC afecta el comportamiento celular, lo que respalda su uso como un nodo funcional para el análisis de vías.

PKC eta El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKCH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PKC eta El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKCH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKCH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PKC eta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKCH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PKC eta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PKC eta en células tumorales con expresión de PRKCH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.