Plásmido CRISPR de Activación (h) PKC delta: sc-400287-ACT

PRKCD codifica la proteína quinasa C delta (PKCδ), una quinasa de serina/treonina sensible al diacilglicerol que acopla las señales inducidas por receptores a programas de fosforilación aguas abajo que controlan la proliferación, la diferenciación, la apoptosis y la remodelación del citoesqueleto. PKCδ participa en el diálogo cruzado entre las vías PKC/MAPK y PI3K–AKT, modula la señalización inflamatoria dependiente de NF-κB y regula las respuestas al daño del ADN mediante la fosforilación de efectores de estrés y de puntos de control. En células inmunitarias y hematopoyéticas, PRKCD ayuda a ajustar la señalización y la tolerancia del receptor de células B, mientras que en contextos epiteliales influye en la adhesión y el comportamiento migratorio. La actividad o expresión desregulada de PRKCD se ha asociado con umbrales alterados de apoptosis, fenotipos inflamatorios y una reconfiguración oncogénica de la señalización, lo que la convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos centrados en vías.

PKC delta El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKCD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PKC delta El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKCD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKCD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PKC delta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKCD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PKC delta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PKC delta en células tumorales con expresión de PRKCD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.