Particules Lentivirales d'Activation (h) PKC beta: sc-400263-LAC

PRKCB code la protéine kinase C bêta (PKCβ), une kinase sérine/thréonine sensible au diacylglycérol et au Ca²⁺, qui relie la signalisation de la phospholipase C induite par les récepteurs à des programmes de phosphorylation contrôlant la prolifération, la différenciation, la migration et la survie. PKCβ agit en aval des récepteurs de l’antigène et des récepteurs Fc pour façonner l’activation des lymphocytes B et la signalisation de l’immunité innée, et elle module les réponses endothéliales et plaquettaires via la régulation de la dynamique du cytosquelette et de la sécrétion. En cancérologie, la signalisation dépendante de PRKCB recoupe les voies MAPK/ERK, NF-κB et PI3K, dont les sorties influencent les transitions d’état cellulaire et les réponses au stress, tandis que sa dérégulation a également été associée à une physiopathologie inflammatoire et vasculaire. Ces caractéristiques font de PRKCB un nœud utile pour explorer les mécanismes de transduction du signal, les interactions entre voies dépendantes de la phosphorylation et les programmes transcriptionnels spécifiques du contexte dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales PKC beta (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRKCB dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PKC beta (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRKCB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PKC beta. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRKCB ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.