PKC beta Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422259

Panoramica

Prkcb codifica la protein chinasi C beta (PKCβ), una chinasi serina/treonina sensibile a diacilglicerolo e Ca2+ che collega la segnalazione della fosfolipasi C dipendente dal recettore a programmi di fosforilazione che controllano proliferazione, apoptosi e differenziamento. Nelle cellule immunitarie ed ematopoietiche del topo, PKCβ è un effettore chiave a valle della segnalazione del recettore delle cellule B (BCR), modulando l’attivazione delle vie NF-κB e MAPK, il rimodellamento del citoscheletro e il traffico vescicolare. PKCβ regola inoltre le risposte endoteliali e della muscolatura liscia attraverso la modulazione dell’adesione, della funzione di barriera e delle vie dello stress ossidativo. Un’attività alterata di PKCβ è stata collegata a una segnalazione immunitaria deregolata e a processi infiammatori, a sostegno della sua rilevanza in studi meccanicistici su fenotipi cardiometabolici e vascolari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC beta (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prkcb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prkcb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prkcb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PKC beta.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prkcb per lo studio della segnalazione di PKC beta, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prkcb critici per la funzione di PKC beta
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prkcb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PKC beta CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PKC beta CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prkcb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PKC beta Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PKC beta (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prkcb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prkcb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.