PKC beta Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422259

Descripción general

Prkcb codifica la proteína quinasa C beta (PKCβ), una quinasa de serina/treonina sensible al diacilglicerol y al Ca2+ que acopla la señalización de la fosfolipasa C dependiente de receptores con programas de fosforilación que controlan la proliferación, la apoptosis y la diferenciación. En células inmunitarias y hematopoyéticas de ratón, PKCβ es un efector clave aguas abajo de la señalización del receptor de células B, modulando la activación de las vías NF-κB y MAPK, la remodelación del citoesqueleto y el tráfico vesicular. PKCβ también regula las respuestas endoteliales y del músculo liso mediante la modulación de la adhesión, la función de barrera y las vías de estrés oxidativo. La alteración de la actividad de PKCβ se ha relacionado con señalización inmunitaria desregulada y procesos inflamatorios, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de fenotipos cardiometabólicos y vasculares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PKC beta (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prkcb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prkcb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prkcb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PKC beta.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prkcb para la investigación de la señalización de PKC beta, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prkcb críticos para la función de PKC beta
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prkcb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PKC beta CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PKC beta CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prkcb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PKC beta (m) y el plásmido HDR PKC beta (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prkcb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prkcb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.