PKA Iα reg Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422400

Visão geral

Prkar1a codifica a subunidade regulatória alfa do tipo I da proteína quinase A (PKA) dependente de cAMP, um importante regulador negativo que se liga às subunidades catalíticas e restringe a atividade da quinase até que o cAMP induza a dissociação do holoenzima. Ao controlar a sinalização de PKA, a PRKAR1A influencia programas de fosforilação que regem o metabolismo, a progressão do ciclo celular, a diferenciação e respostas transcricionais a jusante das vias GPCR–adenilil ciclase–cAMP. Em sistemas murinos, a perturbação de Prkar1a altera a dinâmica da via cAMP/PKA, com efeitos a jusante na expressão gênica regulada por CREB e em uma crosstalk de sinalização mais ampla, incluindo processos associados à MAPK. A desregulação de PRKAR1A e da sinalização cAMP/PKA tem sido associada a fenótipos endócrinos e de controle do crescimento, o que a torna um alvo relevante para estudar mecanismos de doença dependentes de sinalização in vivo e em células cultivadas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PKA Iα reg (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Prkar1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Prkar1a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Prkar1a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PKA Iα reg.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Prkar1a para a investigação da sinalização de PKA Iα reg, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Prkar1a críticos para a função PKA Iα reg
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Prkar1a para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PKA Iα reg Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PKA Iα reg Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Prkar1a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PKA Iα reg Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PKA Iα reg (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Prkar1a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Prkar1a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.