PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422243
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PIPK I α Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PIPK I α-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PIPK I α: sc-377021
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422243 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Gen **Pip5k1a** kodiert die Phosphatidylinositol-4-phosphat-5-Kinase Typ I Alpha (PIPK I α), eine Lipidkinase, die an der Plasmamembran und in endomembranären Kompartimenten Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat (PI(4,5)P2) erzeugt. PI(4,5)P2 unterstützt phosphoinositidabhängige Signalwege und organisiert die Dynamik des Aktinzytoskeletts, den Umsatz fokaler Adhäsionen sowie den Membrantransport und beeinflusst damit Zellmigration, Zytokinese und rezeptorvermittelte Signaltransduktion. Über die Kopplung an die PLC-vermittelte Bildung von Second Messengern und die Regulation der PI3K-Achse trägt PIPK I α zur Feinabstimmung von Signalwegen bei, die Proliferation und Überleben steuern. Eine gestörte Phosphoinositid-Metabolik und PI(4,5)P2-abhängiges zytoskelettales Remodeling sind an der Tumorbiologie, der Funktion von Immunzellen und neurologischen Prozessen beteiligt, wodurch **Pip5k1a** einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien dieser Phänotypen darstellt.
Das PIPK I α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pip5k1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pip5k1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pip5k1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PIPK I α-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pip5k1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PIPK I α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Pip5k1a-Exone abzielen, die für die PIPK I α-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pip5k1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PIPK I α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PIPK I α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pip5k1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PIPK I α HDR-Plasmid (m) und PIPK I α HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pip5k1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pip5k1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.