Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (h): sc-403490
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PIPK I α Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PIPK I α, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PIPK I α Antibody (D-12): sc-377021
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (h) | sc-403490 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PIP5K1A code la phosphatidylinositol-4-phosphate 5-kinase de type I alpha (PIPK I α), une kinase lipidique clé qui génère du phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) à la membrane plasmique et sur les endomembranes. En contrôlant la disponibilité du PI(4,5)P2, PIPK I α régule le remodelage du cytosquelette d’actine, l’endocytose médiée par la clathrine, la dynamique des adhésions focales et le couplage de la signalisation des récepteurs à des voies en aval telles que PLC et PI3K. La signalisation des phosphoinositides dépendante de PIP5K1A influence le trafic membranaire et la migration cellulaire, des processus souvent perturbés dans la biologie tumorale et les phénotypes invasifs. Une activité altérée de PIP5K1A a également été associée à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance et des réponses inflammatoires, ce qui souligne son intérêt pour les études mécanistiques des comportements cellulaires liés aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PIP5K1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PIP5K1A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PIP5K1A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PIPK I α.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PIP5K1A pour l'étude de la signalisation de PIPK I α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PIP5K1A essentiels à la fonction de PIPK I α
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PIP5K1A pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PIPK I α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PIPK I α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PIP5K1A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PIPK I α plasmide HDR (h) et le PIPK I α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PIP5K1A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PIP5K1A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.