PIEZO1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410555-LAC

PIEZO1 codifica un canale cationico non selettivo, sensibile alle sollecitazioni meccaniche, che converte la tensione di membrana e lo stress da taglio in un ingresso di Ca²⁺, consentendo una rapida meccanotrasduzione in diversi tipi cellulari. La segnalazione mediata da PIEZO1 modula processi calcio-dipendenti, tra cui la percezione del flusso endoteliale, il rimodellamento del citoscheletro, il controllo del volume cellulare e risposte trascrizionali a valle collegate a infiammazione e omeostasi tissutale. Negli eritrociti e nelle cellule vascolari, l’attività di PIEZO1 influenza l’equilibrio ionico e la stabilità di membrana, collegandosi a vie che regolano lo stato di idratazione e la meccanobiologia. Una funzione deregolata di PIEZO1 è stata associata a disordini ereditari dei globuli rossi e a fenotipi linfatici o vascolari, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio della segnalazione dipendente dalle forze nei modelli di malattia umana.

Le particelle di attivazione lentivirale PIEZO1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PIEZO1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PIEZO1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PIEZO1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PIEZO1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PIEZO1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.