Partículas Lentivirales de Activación (h) PIEZO1: sc-410555-LAC

PIEZO1 codifica un canal catiónico mecanosensible y no selectivo que convierte la tensión de la membrana y el estrés de cizallamiento en una entrada de Ca²⁺, lo que permite una mecanotransducción rápida en diversos tipos celulares. La señalización de PIEZO1 modula procesos dependientes del calcio, como la detección del flujo en el endotelio, la remodelación del citoesqueleto, el control del volumen celular y respuestas transcripcionales posteriores vinculadas a la inflamación y la homeostasis tisular. En eritrocitos y células vasculares, la actividad de PIEZO1 influye en el equilibrio iónico y la estabilidad de la membrana, conectándola con vías que regulan el estado de hidratación y la mecanobiología. La disfunción de PIEZO1 se ha asociado con trastornos hereditarios de los glóbulos rojos y con fenotipos linfáticos o vasculares, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudiar la señalización dependiente de fuerzas en modelos de enfermedad humana.

Las partículas de activación lentiviral PIEZO1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PIEZO1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PIEZO1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PIEZO1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PIEZO1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PIEZO1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.