PI 3-kinase p55γ Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402964-LAC

PIK3R3 codifica la subunità regolatoria p55γ della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe IA, che collega i recettori tirosin-chinasici attivati e le proteine adattatrici alle isoforme catalitiche p110. Attraverso la modulazione della produzione di PI(3,4,5)P3, la segnalazione PI3K coordina l’attività della via AKT–mTOR, influenzando crescita cellulare, sopravvivenza, metabolismo e dinamica del citoscheletro. Un’alterata regolazione dei componenti della via PI3K è frequentemente associata a segnalazione oncogenica, proliferazione aberrante e resistenza allo stress cellulare, rendendo PIK3R3 un nodo rilevante per l’analisi della via. In contesti immunitari ed epiteliali, gli output della PI3K dipendenti da p55γ possono inoltre modulare la motilità e il crosstalk tra vie di segnalazione che incidono su programmi infiammatori e del microambiente associato al tumore.

Le particelle di attivazione lentivirale PI 3-kinase p55γ (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PIK3R3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PI 3-kinase p55γ (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PIK3R3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PI 3-kinase p55γ. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PIK3R3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.