PHT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425761

Übersicht

Slc15a3 kodiert den protonengekoppelten Histidin-/Dipeptid-Transporter PHT2, ein Mitglied der SLC15-Familie, die an der endolysosomalen Soluttransporterfunktion und der intrazellulären Peptidverarbeitung beteiligt ist. Durch die Kopplung des Peptidtransports an Protonengradienten trägt PHT2 zur lysosomalen Homöostase, zur Nährstoffsensorik sowie zur Wechselwirkung zwischen vesikulärem Transport und metabolischen Programmen in myeloiden und anderen immunrelevanten Zelltypen bei. Eine veränderte Aktivität von Transportern der SLC15-Familie wurde mit fehlregulierter angeborener Immun-Signalübertragung und entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht, wodurch Slc15a3 einen nützlichen Ansatzpunkt darstellt, um zu untersuchen, wie endosomaler/lysosomaler Transport Zytokinantworten und antigenverarbeitungsassoziierte Signalwege beeinflusst. In Mausmodellen ermöglicht die gezielte Störung von Slc15a3 eine mechanistische Untersuchung vesikulärer, pH-abhängiger Prozesse, die die Immunaktivierung und Modelle der Gewebeentzündung prägen.

Das PHT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc15a3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc15a3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc15a3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PHT2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc15a3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PHT2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc15a3-Exone abzielen, die für die PHT2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc15a3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PHT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PHT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc15a3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PHT2 HDR-Plasmid (m) und PHT2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc15a3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc15a3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.