PHT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425761

Panoramica

Slc15a3 codifica il trasportatore di istidina/dipeptidi accoppiato ai protoni PHT2, un membro della famiglia SLC15 coinvolto nel trasporto di soluti endolisosomiali e nella gestione intracellulare dei peptidi. Accoppiando il trasporto peptidico ai gradienti protonici, PHT2 contribuisce all’omeostasi lisosomiale, al sensing dei nutrienti e al crosstalk tra il traffico vescicolare e i programmi metabolici nelle cellule mieloidi e in altri tipi cellulari rilevanti per il sistema immunitario. Un’alterata attività della famiglia SLC15 è stata associata a una deregolazione della segnalazione immunitaria innata e a stati infiammatori, rendendo Slc15a3 un nodo utile per studiare come il trasporto endosomiale/lisosomiale influenzi le risposte citochiniche e le vie associate al processamento dell’antigene. Nei modelli murini, la perturbazione di Slc15a3 consente un’analisi meccanicistica dei processi dipendenti dal pH vescicolare che modellano l’attivazione immunitaria e i modelli di infiammazione tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PHT2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc15a3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc15a3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc15a3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PHT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc15a3 per lo studio della segnalazione di PHT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc15a3 critici per la funzione di PHT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc15a3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PHT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PHT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc15a3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PHT2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PHT2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc15a3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc15a3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.