PHF14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411313

Übersicht

PHF14 (PHD-Finger-Protein 14) kodiert einen chromatinassoziierten Regulator, der an der transkriptionellen Kontrolle beteiligt ist, indem er Histonmodifikationen erkennt und epigenetische Zustände koordiniert. PHF14 wurde mit der Regulation von Zelldifferenzierungsprogrammen, dem Fortschreiten des Zellzyklus und Genexpressionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die die Zytoskelettorganisation und entwicklungsbezogene Signalwege prägen. Durch die Modulation der Chromatinzugänglichkeit beeinflusst PHF14 Signalwege, die an der Festlegung von Zelllinien und der Gewebehomöostase beteiligt sind, und ist damit relevant für die fehlregulierte Transkription, wie sie bei Krebs und Entwicklungsstörungen beobachtet wird. Die Forschung zu PHF14 stützt seine Nutzung als Knotenpunkt zur Analyse chromatindriven Phänotypen wie veränderter Proliferation, Migration und kontextabhängiger Genexpression.

Das PHF14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PHF14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PHF14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PHF14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PHF14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PHF14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PHF14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PHF14-Exone abzielen, die für die PHF14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PHF14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PHF14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PHF14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PHF14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PHF14 HDR-Plasmid (h) und PHF14 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PHF14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PHF14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.