PH-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409966

Übersicht

P4HTM kodiert das transmembrane Protein der Prolyl-4-Hydroxylase (PH-4), eine mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziierte Dioxygenase, die bei ausgewählten Substraten die Hydroxylierung von Prolin katalysiert und damit die Verfügbarkeit von Sauerstoff und metabolischen Kofaktoren mit der posttranslationalen Proteinmodifikation verknüpft. Als Mitglied der Prolyl-4-Hydroxylase-Familie ist PH-4 so positioniert, dass es Proteinfehlfaltung, -stabilität und Qualitätskontrollprozesse im sekretorischen Weg beeinflussen kann – mit nachgelagerten Effekten auf zelluläre Stressantworten und die Proteostase. Die Aktivität von P4HTM wurde mit der Sauerstoffsensorik und der Regulation hypoxie-responsiver Signalwege in Verbindung gebracht und integriert sich in Pfade, die die zelluläre Anpassung an reduzierte Sauerstoffspannung prägen. Genetische und funktionelle Studien haben P4HTM mit krankheitsrelevanten Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die die Neuroentwicklung und die metabolische Homöostase betreffen, wodurch es zu einem Ziel für mechanistische Untersuchungen in humanen Zellsystemen wird.

Das PH-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P4HTM-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P4HTM-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P4HTM nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PH-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P4HTM-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PH-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P4HTM-Exone abzielen, die für die PH-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P4HTM-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PH-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PH-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P4HTM-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PH-4 HDR-Plasmid (h) und PH-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P4HTM-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P4HTM-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.