Plasmide CRISPR d'Activation (h) PGF2αR: sc-402974-ACT

PTGFR code le récepteur de la prostaglandine F2α (PGF2αR), un RCPG de type rhodopsine qui se lie à la PGF2α pour initier une signalisation dépendante de Gq/11, augmentant le calcium intracellulaire et activant la phospholipase C, la PKC et les voies MAPK en aval. Par ces cascades, PGF2αR régule la contractilité du muscle lisse, le tonus vasculaire et des réponses inflammatoires dépendantes du contexte, reliant la biologie des prostanoïdes aux programmes de remodelage tissulaire. Une signalisation PTGFR altérée a été étudiée dans la physiologie de la reproduction, la régulation de la pression intraoculaire et les signaux du microenvironnement associés au cancer, où la signalisation induite par les prostaglandines peut influencer la prolifération, la migration et la dynamique de la matrice extracellulaire. En tant que récepteur membranaire intégrant des signaux d’eicosanoïdes, PGF2αR constitue un nœud accessible pour explorer les sorties transcriptionnelles et phénotypiques médiées par les RCPG.

PGF2αR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTGFR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PGF2αR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTGFR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTGFR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PGF2αR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTGFR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PGF2αR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PGF2αR dans les cellules tumorales présentant une expression de PTGFR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.