PFK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401023

Übersicht

PFKM kodiert die Muskel-Isoform der Phosphofructokinase-1 (PFK-1), eines geschwindigkeitsbestimmenden Enzyms der Glykolyse, das die ATP-abhängige Umwandlung von Fructose-6-phosphat zu Fructose-1,6-bisphosphat katalysiert. Als zentraler Kontrollpunkt des glykolytischen Flusses integriert PFK-1 allosterische Regulation durch den zellulären Energiestatus und Metaboliten, um die Glukoseverwertung mit dem ATP-Bedarf zu koordinieren. Die Aktivität von PFKM beeinflusst den zentralen Kohlenstoffstoffwechsel, die Laktatproduktion sowie nachgeschaltete biosynthetische Signalwege, die mit proliferativen und stressadaptiven Programmen gekoppelt sind. Eine genetische Störung von PFKM ist mit der Glykogenspeicherkrankheit Typ VII (Tarui-Krankheit) assoziiert und wird genutzt, um zu untersuchen, wie eine veränderte Glykolyse zu metabolischer Dysfunktion und zellulären Phänotypen beiträgt, die für die neuromuskuläre und hämatologische Biologie relevant sind.

Das PFK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PFKM-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PFKM-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PFKM nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PFK-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PFKM-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PFK-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PFKM-Exone abzielen, die für die PFK-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PFKM-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PFK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PFK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PFKM-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PFK-1 HDR-Plasmid (h) und PFK-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PFKM-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PFKM-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.