PFK-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401023

Panoramica

PFKM codifica l’isoforma muscolare della fosfofruttochinasi-1 (PFK-1), un enzima limitante della velocità della glicolisi che catalizza la conversione, dipendente da ATP, del fruttosio-6-fosfato in fruttosio-1,6-bisfosfato. In quanto punto chiave di controllo del flusso glicolitico, PFK-1 integra la regolazione allosterica mediata dallo stato energetico cellulare e dai metaboliti per coordinare l’utilizzo del glucosio con la richiesta di ATP. L’attività di PFKM influenza il metabolismo centrale del carbonio, la produzione di lattato e le vie biosintetiche a valle associate a programmi proliferativi e di adattamento allo stress. L’alterazione genetica di PFKM è collegata alla glicogenosi di tipo VII (malattia di Tarui) ed è utilizzata per studiare come una glicolisi modificata contribuisca alla disfunzione metabolica e a fenotipi cellulari rilevanti per la biologia neuromuscolare ed ematologica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PFK-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PFKM in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PFKM insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PFKM a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PFK-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PFKM per lo studio della segnalazione di PFK-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PFKM critici per la funzione di PFK-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PFKM per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PFK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PFK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PFKM. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PFK-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PFK-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PFKM per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PFKM definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.