Peroxin 10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406226

Panoramica

PEX10 codifica la perossina 10, una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio RING finger incorporata nella membrana perossisomiale, essenziale per la biogenesi dei perossisomi e per l’importazione delle proteine della matrice. Come parte del macchinario di ubiquitinazione perossisomiale insieme a PEX2 e PEX12, PEX10 contribuisce a regolare il riciclo del recettore di importazione PEX5 e sostiene vie metaboliche perossisomiali, tra cui la β-ossidazione degli acidi grassi a catena molto lunga e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. L’alterazione di PEX10 compromette l’assemblaggio dei perossisomi e compromette il metabolismo lipidico e l’equilibrio redox, processi centrali nelle risposte cellulari allo stress e nel crosstalk tra organelli. Varianti patogene di PEX10 sono associate a disturbi della biogenesi perossisomiale nello spettro di Zellweger, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi di disfunzione degli organelli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Peroxin 10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PEX10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PEX10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PEX10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Peroxin 10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PEX10 per lo studio della segnalazione di Peroxin 10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PEX10 critici per la funzione di Peroxin 10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PEX10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PEX10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Peroxin 10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Peroxin 10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PEX10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PEX10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.