Plásmido Doble Nickase (h) Perlecan: sc-400823-NIC

HSPG2 codifica perlecano, un gran proteoglucano de heparán sulfato de las membranas basales y matrices pericelulares que se une a factores de crecimiento y a componentes estructurales de la matriz extracelular (MEC) para regular la arquitectura tisular. El perlecano modula la adhesión celular, la mecanotransducción y la señalización de morfógenos al organizar gradientes e interacciones con correceptores en vías como FGF, VEGF y TGF-β, influyendo en la angiogénesis, la condrogénesis y las respuestas a heridas. Sus funciones en la MEC están estrechamente ligadas a la integridad vascular y a la homeostasis del cartílago, y se ha asociado la expresión o estructura alteradas de HSPG2 con trastornos esqueléticos congénitos y con la remodelación del microambiente tumoral, relevante para estudios de invasión y señalización del estroma. Como organizador de la matriz, el perlecano se examina con frecuencia en modelos de células endoteliales, de músculo liso y estromales para desentrañar señales extracelulares que controlan la proliferación y la migración.

Perlecan El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSPG2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSPG2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSPG2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSPG2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.