Periostin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400744-ACT

POSTN codifica a periostina, uma proteína matricelular secretada e enriquecida em tecidos conjuntivos, que se liga a componentes da matriz extracelular e a integrinas para regular a adesão celular, a migração e a remodelação tecidual. A periostina participa da organização da matriz extracelular e da mecanotransdução, sustentando a sinalização por adesões focais e por vias a jusante, como FAK/PI3K/AKT e MAPK, que influenciam a ativação de fibroblastos e as interações epitélio–mesênquima. A expressão alterada de POSTN está associada à remodelação fibrótica e a respostas inflamatórias dos tecidos, e frequentemente é relacionada à dinâmica do microambiente tumoral, incluindo expansão do estroma, sinais angiogênicos e formação de nichos metastáticos. Essas propriedades tornam a periostina uma ferramenta molecular útil para estudar a sinalização impulsionada pela matriz extracelular e a comunicação célula–matriz em modelos relevantes para doenças.

Periostin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POSTN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Periostin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POSTN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POSTN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Periostin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POSTN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Periostin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Periostin em células tumorais com expressão de POSTN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.