periaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404868

Übersicht

PRX kodiert Periaxin, ein in Schwann-Zellen angereichertes Gerüstprotein, das für die Stabilität und Aufrechterhaltung des Myelins peripherer Nerven essenziell ist. Periaxin ist an der Organisation des Zytoskeletts und der Architektur von Membrandomänen beteiligt, unterstützt die Elongation von Schwann-Zellen und die Bildung myelinassoziierter Komplexe, die die Axon-Glia-Interaktionen steuern. Eine Störung von PRX beeinträchtigt die Myelinhomöostase und die Nervenleitung und bringt eine veränderte Periaxin-Funktion mit erblichen peripheren Neuropathien in Verbindung, darunter die Charcot–Marie–Tooth-Krankheit Typ 4F und Dejerine–Sottas-ähnliche Phänotypen. Entsprechend wird PRX häufig in Signalwegen untersucht, die die Myelinisierung, die Differenzierung von Schwann-Zellen und Stressantworten regulieren und damit die Integrität peripherer Nerven beeinflussen.

Das periaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRX-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRX-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRX nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die periaxin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRX-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der periaxin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRX-Exone abzielen, die für die periaxin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRX-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom periaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom periaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRX-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das periaxin HDR-Plasmid (h) und periaxin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRX-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRX-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.