periaxin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404868

Panoramica

PRX codifica la periaxina, una proteina di impalcatura arricchita nelle cellule di Schwann, essenziale per la stabilità e il mantenimento della mielina dei nervi periferici. La periaxina partecipa all’organizzazione del citoscheletro e dell’architettura dei domini di membrana, sostenendo l’allungamento delle cellule di Schwann e la formazione di complessi associati alla mielina che regolano le interazioni tra assone e glia. L’alterazione di PRX compromette l’omeostasi della mielina e la conduzione nervosa, collegando la funzione anomala della periaxina a neuropatie periferiche ereditarie, tra cui la malattia di Charcot–Marie–Tooth di tipo 4F e fenotipi simili alla sindrome di Dejerine–Sottas. Di conseguenza, PRX è ampiamente studiato nei pathway che controllano la mielinizzazione, la differenziazione delle cellule di Schwann e le risposte allo stress che influenzano l’integrità dei nervi periferici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO periaxin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRX in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRX insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRX a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina periaxin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRX per lo studio della segnalazione di periaxin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRX critici per la funzione di periaxin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRX per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal periaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal periaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRX. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal periaxin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR periaxin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRX per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRX definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.