Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pepsin A4 (h): sc-418415

Présentation

PGA4 code la pepsine A4, une endopeptidase aspartique produite sous forme de zymogène sécrété par la muqueuse gastrique et activée en conditions acides pour cliver les protéines alimentaires et endogènes. En tant que membre de la famille des pepsines, la pepsine A4 contribue à la protéostasie gastro-intestinale, en influençant la génération de peptides, la digestion des protéines dans la lumière digestive et, en aval, la disponibilité des antigènes et des nutriments. Son activité s’intègre à la biologie de l’acidité gastrique et aux processus de barrière muqueuse, et des modifications d’expression ou de l’équilibre des protéases sont souvent évaluées dans les études du remodelage de l’épithélium gastrique et des pathologies associées à l’inflammation. PGA4 est donc pertinent pour disséquer les voies dépendantes des protéases dans l’estomac et pour des recherches orientées biomarqueurs dans des contextes de maladies gastriques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pepsin A4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PGA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PGA4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PGA4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pepsin A4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PGA4 pour l'étude de la signalisation de Pepsin A4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PGA4 essentiels à la fonction de Pepsin A4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PGA4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pepsin A4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pepsin A4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PGA4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pepsin A4 plasmide HDR (h) et le Pepsin A4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PGA4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PGA4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.