Peg1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421634-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Peg1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Peg1 Double Nickase Plasmid (m) e il Peg1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mest. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Peg1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421634-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Mest, noto anche come Peg1, è un gene sottoposto a imprinting che codifica una proteina associata alla membrana implicata nello sviluppo embrionale e placentare, nella differenziazione degli adipociti e nella regolazione della crescita. L’attività di Peg1/MEST è stata collegata a meccanismi di controllo epigenetico, tra cui l’espressione specifica in base al genitore d’origine e la metilazione del DNA nelle regioni di controllo dell’imprinting, che influenzano i programmi trascrizionali durante lo sviluppo. Un’alterazione dell’espressione di Mest/MEST o dello stato di imprinting è associata a crescita fetale anomala, insufficienza placentare e fenotipi metabolici come variazioni dell’adiposità. In oncologia, una deregolazione di MEST è stata riportata come caratteristica di una riprogrammazione epigenetica associata ai tumori, rendendolo rilevante per studi su imprinting, vie di sviluppo e transizioni dello stato cellulare.
Peg1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mest nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mest. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mest. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mest interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.