Plasmide Double Nickase (m) Peg1: sc-421634-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Peg1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Peg1 Double Nickase (m) et le plasmide Peg1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Mest. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Peg1 | sc-421634-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Mest**, également appelé **Peg1**, est un gène soumis à empreinte qui code une protéine associée à la membrane, impliquée dans le développement embryonnaire et placentaire, la différenciation des adipocytes et la régulation de la croissance. L’activité de Peg1/MEST a été reliée à des mécanismes de contrôle épigénétique, notamment une expression spécifique du parent d’origine et la méthylation de l’ADN au niveau des régions de contrôle de l’empreinte, qui influencent les programmes de transcription au cours du développement. Une expression modifiée de Mест/MEST ou une altération du statut d’empreinte est associée à une croissance fœtale anormale, à une insuffisance placentaire et à des phénotypes métaboliques tels que des variations de l’adiposité. En biologie du cancer, une dérégulation de MEST a été décrite comme une caractéristique du reprogrammation épigénétique associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’empreinte, des voies du développement et des transitions d’état cellulaire.
Peg1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mest dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mest. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mest. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mest.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.