Plasmide Double Nickase (h) PDX-1: sc-400792-NIC

PDX1 code le facteur de transcription à homéoboîte PDX-1, un régulateur majeur du développement du pancréas et de l’identité des cellules β matures. PDX-1 contrôle la spécification de la lignée endocrinienne et la transcription du gène de l’insuline en réponse au glucose en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec des cofacteurs tels que MAFA et NEUROD1, influençant des programmes liés à la protéostasie du réticulum endoplasmique (RE) et au couplage métabolique. Dans les îlots adultes, PDX-1 intègre les voies de détection des nutriments et de réponse au stress afin de maintenir la fonction des cellules β, et une activité altérée de PDX1 est associée à une sécrétion d’insuline diminuée et à des phénotypes liés au diabète. Une expression ou une fonction dérégulée de PDX-1 est également utilisée comme marqueur des changements d’état cellulaire pancréatique lors de la différenciation et de la modélisation des maladies.

PDX-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.