Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDI (m): sc-422099

Présentation

P4hb code la protéine disulfure isomérase (PDI), une oxydoréductase abondante du réticulum endoplasmique (RE) qui catalyse la formation, la réduction et l’isomérisation des ponts disulfure afin de soutenir le repliement et la maturation des protéines sécrétées et membranaires. La PDI agit au sein des réseaux de protéostase du RE, en partenariat avec des chaperonnes et d’autres oxydoréductases, pour réguler le repliement oxydatif des protéines et le contrôle qualité, et elle contribue aux voies de signalisation du stress du RE et de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). Grâce à son activité d’échange thiol–disulfure et à ses interactions avec des substrats mal repliés, la PDI influence l’homéostasie redox, le trafic protéique et les décisions de survie cellulaire en situation de stress protéotoxique. Une activité dérégulée de P4hb/PDI a été associée à des états pathologiques caractérisés par un stress chronique du RE et un déséquilibre redox, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles de neurodégénérescence, de dysfonction métabolique et de biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDI (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P4hb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P4hb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P4hb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDI.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P4hb pour l'étude de la signalisation de PDI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P4hb essentiels à la fonction de PDI
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P4hb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PDI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus P4hb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDI plasmide HDR (m) et le PDI (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P4hb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P4hb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.