PDI CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-422099

개요

P4hb는 단백질 이황화 이성질화효소(protein disulfide isomerase, PDI)를 암호화하며, PDI는 분비 단백질과 막 단백질의 접힘과 성숙을 돕기 위해 이황화 결합의 형성, 환원, 이성질화를 촉매하는 풍부한 소포체(ER) 산화환원효소입니다. PDI는 ER 단백질 항상성(proteostasis) 네트워크에서 샤페론 및 다른 산화환원효소들과 협력하여 산화적 단백질 접힘과 품질 관리를 조절하고, ER 스트레스 신호전달과 미접힘 단백질 반응(UPR) 경로에도 기여합니다. PDI는 티올-이황화 교환 활성과 잘못 접힌 기질과의 상호작용을 통해 산화환원 항상성, 단백질 수송, 그리고 단백질 독성 스트레스(proteotoxic stress) 하에서의 세포 생존 결정에 영향을 미칩니다. P4hb/PDI 활성의 조절 이상은 만성 ER 스트레스와 변화된 산화환원 균형이 특징인 병적 상태와 연관되어 왔으며, 그 결과 신경퇴행, 대사 기능 이상, 암 생물학 모델에서 기전 연구를 위한 관련 표적으로 여겨집니다.

PDI CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 P4hb 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 P4hb 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 P4hb의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 PDI 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 PDI 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 P4hb 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• PDI 기능에 중요한 P4hb 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 P4hb 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• PDI CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 PDI CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 P4hb 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  PDI HDR 플라스미드 (m) 및 PDI HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 P4hb 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 P4hb 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.