PDE6β Lentiviral Activation Particles (m): sc-422166-LAC

Das Mausgen **Pde6b** kodiert die β‑Untereinheit der cGMP‑Phosphodiesterase 6 der Stäbchen‑Photorezeptoren (PDE6β), einen zentralen Effektor der Rhodopsin‑Transducin‑Phototransduktionskaskade. Nach lichtinduzierter Aktivierung katalysiert PDE6β die Hydrolyse von cGMP, senkt dadurch das intrazelluläre cGMP und fördert das Schließen cGMP‑gesteuerter Kanäle, wodurch die elektrische Antwort des Photorezeptors geformt wird. Diese Signalachse reguliert die cGMP‑ und Ca²⁺‑Homöostase in den Außensegmenten der Stäbchen und greift in nachgeschaltete Prozesse ein, die das Überleben von Photorezeptoren und die Funktion retinaler Schaltkreise beeinflussen. Eine Störung des PDE6β‑abhängigen cGMP‑Umsatzes ist eng mit erblichen Netzhautdegenerations‑Phänotypen verknüpft, weshalb **Pde6b** ein wichtiges Ziel für mechanistische Studien zur Stäbchenfunktion und zu krankheitsassoziierten Signalungleichgewichten ist.

PDE6β Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Pde6b-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PDE6β Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Pde6b-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PDE6β-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Pde6b-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.