Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCYT2 (h): sc-416514

Présentation

PCYT2 code la CTP:phosphoéthanolamine cytidylyltransférase, une enzyme limitante de la voie de Kennedy qui génère le CDP‑éthanolamine nécessaire à la biosynthèse de la phosphatidyléthanolamine (PE). En contrôlant la disponibilité en PE, PCYT2 influence la biogenèse des membranes, la composition des membranes du réticulum endoplasmique (RE) et des mitochondries, la dynamique des gouttelettes lipidiques et le remodelage membranaire associé à l’autophagie. L’homéostasie des phospholipides dépendante de PCYT2 s’inscrit à l’interface de l’équilibre énergétique cellulaire et des voies de signalisation du stress qui répondent aux modifications de la composition lipidique des membranes. La perturbation génétique ou la diminution de l’activité de PCYT2 a été associée à des phénotypes neuromusculaires et neurodéveloppementaux héréditaires, soulignant sa pertinence pour modéliser, dans des cellules humaines, des mécanismes pathogéniques liés au métabolisme lipidique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PCYT2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PCYT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PCYT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PCYT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PCYT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PCYT2 pour l'étude de la signalisation de PCYT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PCYT2 essentiels à la fonction de PCYT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PCYT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PCYT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PCYT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PCYT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PCYT2 plasmide HDR (h) et le PCYT2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PCYT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PCYT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.