PCMT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418153

Panoramica

PCMT1 codifica la proteina O-metiltransferasi 1 della proteina-L-isoaspartato (D-aspartato), una metiltransferasi SAM-dipendente che ripara i danni isoaspartilici nelle proteine indotti dall’età o dallo stress, metilando residui anomali di Asp/Asn per facilitare la riconversione ai normali legami peptidici. Questa attività di controllo qualità proteica sostiene la proteostasi e limita l’accumulo di proteine disfunzionali inclini all’aggregazione, collegando PCMT1 alle risposte cellulari allo stress ossidativo e al mantenimento di proteine a lunga vita nel citosol e nel nucleo. La funzione di PCMT1 interseca vie che regolano il turnover proteico, le reti di chaperoni e la resilienza allo stress, rendendola rilevante per studi sull’invecchiamento delle proteine e sul danno post-traduzionale. Alterazioni dell’attività di PCMT1 sono state investigate in ambito neurobiologico e in altri disturbi in cui il danno proteico e meccanismi di riparazione compromessi contribuiscono alla disfunzione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PCMT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PCMT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PCMT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PCMT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PCMT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PCMT1 per lo studio della segnalazione di PCMT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PCMT1 critici per la funzione di PCMT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PCMT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PCMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PCMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PCMT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PCMT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PCMT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PCMT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PCMT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.