Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCMT1 (h): sc-418153

Présentation

PCMT1 code la protéine O‑méthyltransférase 1 des isoaspartates (D‑aspartate) de la protéine‑L, une méthyltransférase dépendante de la SAM qui répare les dommages isoaspartyliques induits par l’âge ou le stress dans les protéines en méthylant des résidus Asp/Asn anormaux afin de faciliter leur reconversion vers des liaisons normales. Cette activité de contrôle qualité des protéines soutient la protéostasie et limite l’accumulation de protéines dysfonctionnelles sujettes à l’agrégation, reliant PCMT1 aux réponses cellulaires au stress oxydant et au maintien, dans le cytosol et le noyau, de protéines à longue durée de vie. La fonction de PCMT1 recoupe des voies impliquées dans le renouvellement des protéines, les réseaux de chaperonnes et la résistance au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du vieillissement des protéines et des dommages post‑traductionnels. Des altérations de l’activité de PCMT1 ont été examinées dans des contextes de neurobiologie et d’autres troubles où les dommages protéiques et l’altération des mécanismes de réparation contribuent au dysfonctionnement cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PCMT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PCMT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PCMT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PCMT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PCMT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PCMT1 pour l'étude de la signalisation de PCMT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PCMT1 essentiels à la fonction de PCMT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PCMT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PCMT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PCMT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PCMT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PCMT1 plasmide HDR (h) et le PCMT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PCMT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PCMT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.