Plásmido Doble Nickase (h) PC-PLD2: sc-402056-NIC

El gen humano **PLD2** codifica la fosfolipasa D2 (PC-PLD2), una enzima asociada a membrana que hidroliza la fosfatidilcolina para generar ácido fosfatídico, un segundo mensajero lipídico que modula la curvatura de la membrana y los microdominios de señalización. La actividad de PLD2 se integra con vías impulsadas por receptores, incluidas las de EGFR, GPCR y las señales de pequeñas GTPasas, influyendo en el tráfico vesicular, la endocitosis, la remodelación del citoesqueleto de actina y la migración celular. Mediante la regulación dependiente de ácido fosfatídico de las vías de señalización mTOR y MAPK, PLD2 contribuye a respuestas celulares metabólicas y relacionadas con el crecimiento, y se ha vinculado a salidas de señalización inflamatoria. Se ha descrito una señalización de PLD2 desregulada en contextos como la invasividad de células tumorales, la quimiotaxis de células inmunitarias y procesos neuroinflamatorios, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la señalización mediada por lípidos.

PC-PLD2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLD2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.