Plásmido Doble Nickase (m) paxillin: sc-422546-NIC

El gen Pxn de ratón codifica la paxilina, un adaptador multidominio de las adhesiones focales que coordina la señalización dependiente de integrinas y la remodelación del citoesqueleto de actina durante la adhesión, el extendido y la migración celular. La paxilina actúa como andamiaje para quinasas y reguladores de GTPasas, integrando señales de FAK/SRC y de las vías posteriores de la familia RHO para modular el recambio de las adhesiones focales y la mecanotransducción. A través de estas funciones influye en la detección de la matriz extracelular, la dinámica de los lamelipodios y la polaridad celular. La desregulación de la señalización de la paxilina y de la remodelación de las adhesiones focales se asocia con frecuencia a cambios en la motilidad y a fenotipos invasivos en modelos relevantes para enfermedades, lo que convierte a Pxn en un nodo útil para estudiar redes de señalización asociadas a la adhesión.

paxillin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pxn en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pxn. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pxn. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pxn alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.