Pax-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422114

Descripción general

El gen Pax1 de ratón codifica el factor de transcripción de caja pareada Pax-1, una proteína nuclear que se une al ADN y regula la especificación de linaje y el patrón de desarrollo durante la embriogénesis, en particular en el mesodermo paraxial y en la columna vertebral en formación. Pax-1 integra señales del desarrollo para controlar programas transcripcionales implicados en la condrogénesis, la diferenciación del esclerotomo y la organización segmentaria del esqueleto axial. Las alteraciones de la función de Pax1 se han relacionado con malformaciones vertebrales y esqueléticas congénitas y se utiliza como marcador y regulador en estudios sobre la formación de la columna y el desarrollo musculoesquelético. En modelos celulares, la actividad de Pax-1 se investiga por sus efectos sobre redes transcripcionales que gobiernan la proliferación y la diferenciación en contextos de progenitores mesenquimales y del cartílago.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pax-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pax1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pax1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pax1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pax-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pax1 para la investigación de la señalización de Pax-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pax1 críticos para la función de Pax-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pax1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pax-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Pax-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pax1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pax-1 (m) y el plásmido HDR Pax-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pax1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pax1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.