Pax-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422114

Panoramica

Il gene murino Pax1 codifica il fattore di trascrizione Pax-1 con paired box, una proteina nucleare legante il DNA che regola la specificazione di linea e la formazione di pattern durante l’embriogenesi, in particolare nel mesoderma paraassiale e nella colonna vertebrale in sviluppo. Pax-1 integra segnali di sviluppo per controllare programmi trascrizionali coinvolti nella condrogenesi, nella differenziazione dello sclerotomo e nell’organizzazione segmentale dello scheletro assiale. Alterazioni della funzione di Pax1 sono state associate a malformazioni congenite vertebrali e scheletriche e il gene viene utilizzato come marcatore e regolatore negli studi sulla formazione della colonna e sullo sviluppo muscoloscheletrico. Nei modelli cellulari, l’attività di Pax-1 viene studiata per i suoi effetti sulle reti trascrizionali che governano proliferazione e differenziamento in contesti di progenitori mesenchimali e cartilaginei.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pax1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pax1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pax1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pax-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pax1 per lo studio della segnalazione di Pax-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pax1 critici per la funzione di Pax-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pax1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pax-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Pax-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pax1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pax-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Pax-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pax1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pax1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.