Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO patched/PTCH1 (h): sc-400457
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- patched/PTCH1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique patched/PTCH1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: patched/PTCH1 Antibody (A-2): sc-518044
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO patched/PTCH1 (h) | sc-400457 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PTCH1 code Patched, un récepteur transmembranaire à 12 passages qui freine la signalisation Hedgehog en inhibant SMO en l’absence de ligand. La liaison de Sonic/Indian/Desert Hedgehog lève cette répression, permettant l’activation de programmes transcriptionnels dépendants de GLI qui régissent l’organisation embryonnaire, l’homéostasie tissulaire et les décisions de destinée cellulaire. L’activité de PTCH1 relie le transport membranaire des stérols et le trafic ciliaire à la sortie de la voie, en intégrant des signaux qui modulent la prolifération et la différenciation. Une signalisation PTCH1–Hedgehog dérégulée est impliquée dans des troubles du développement et des processus oncogéniques, faisant de PTCH1 un nœud clé pour l’étude de la voie et des relations génotype–phénotype.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO patched/PTCH1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTCH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTCH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTCH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine patched/PTCH1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTCH1 pour l'étude de la signalisation de patched/PTCH1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PTCH1 essentiels à la fonction de patched/PTCH1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTCH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le patched/PTCH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le patched/PTCH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTCH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le patched/PTCH1 plasmide HDR (h) et le patched/PTCH1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTCH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTCH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.