Plásmido CRISPR de Activación (h) PARP-7: sc-407777-ACT

El gen humano **TIPARP** codifica **PARP-7** (polimerasa de poli(ADP-ribosa) inducible por TCDD), una **mono-ADP-ribosiltransferasa** que modifica sustratos proteicos para regular la transducción de señales, los programas transcripcionales y la estabilidad de las proteínas. PARP-7 se induce aguas abajo de la señalización del **receptor de hidrocarburos de arilo (AHR)** y participa en el control por retroalimentación de las vías de respuesta a xenobióticos, moldeando la adaptación celular a ligandos ambientales. Mediante la modulación dependiente de ADP-ribosilación de proteínas reguladoras, TIPARP influye en redes de expresión génica sensibles al estrés y en procesos relacionados con la inmunidad. La actividad alterada de TIPARP/PARP-7 se ha asociado con una señalización inflamatoria desregulada y estados transcripcionales relevantes para el cáncer, lo que respalda estudios mecanísticos sobre la intercomunicación entre vías.

PARP-7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TIPARP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PARP-7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TIPARP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TIPARP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PARP-7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TIPARP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PARP-7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PARP-7 en células tumorales con expresión de TIPARP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.