PARP-10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-437160

Panoramica

Parp10 codifica PARP-10, una mono-ADP-ribosiltransferasi che regola la funzione delle proteine attraverso l’ADP-ribosilazione, influenzandone la stabilità, la localizzazione subcellulare e gli output di segnalazione. PARP-10 è stata collegata al controllo delle risposte al danno al DNA, alla tolleranza allo stress replicativo e a processi associati alla cromatina, integrandosi con la regolazione proteica dipendente dall’ubiquitina e con altre reti di modificazioni post-traduzionali. Nei sistemi murini, l’attività di PARP-10 viene comunemente studiata nel contesto del mantenimento del genoma, della progressione del ciclo cellulare e della segnalazione adattativa allo stress che modella l’omeostasi cellulare. La deregolazione delle vie di ADP-ribosilazione è ampiamente associata a proliferazione aberrante e segnalazione infiammatoria, rendendo Parp10 un nodo utile per studi meccanicistici del crosstalk tra vie di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PARP-10 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Parp10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Parp10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Parp10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PARP-10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Parp10 per lo studio della segnalazione di PARP-10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Parp10 critici per la funzione di PARP-10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Parp10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PARP-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PARP-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Parp10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PARP-10 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PARP-10 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Parp10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Parp10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.