Plasmide CRISPR/Cas9 KO PARP-10 (m): sc-437160

Présentation

Parp10 code pour PARP-10, une mono-ADP-ribosyltransférase qui régule la fonction des protéines via l’ADP-ribosylation, en influençant la stabilité des protéines, leur localisation subcellulaire et les sorties de signalisation. PARP-10 a été associée au contrôle des réponses aux dommages de l’ADN, à la tolérance au stress de réplication et à des processus liés à la chromatine, en s’intégrant à la régulation des protéines dépendante de l’ubiquitine ainsi qu’à d’autres réseaux de modifications post-traductionnelles. Dans les systèmes murins, l’activité de PARP-10 est couramment étudiée dans le contexte du maintien du génome, de la progression du cycle cellulaire et d’une signalisation adaptative au stress qui façonne l’homéostasie cellulaire. La dérégulation des voies d’ADP-ribosylation est largement associée à une prolifération aberrante et à une signalisation inflammatoire, faisant de Parp10 un nœud utile pour des études mécanistiques du dialogue entre voies dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PARP-10 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Parp10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Parp10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Parp10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PARP-10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Parp10 pour l'étude de la signalisation de PARP-10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Parp10 essentiels à la fonction de PARP-10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Parp10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PARP-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PARP-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Parp10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PARP-10 plasmide HDR (m) et le PARP-10 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Parp10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Parp10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.