Paraplegin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406299

Panoramica

SPG7 codifica paraplegina, una metalloproteasi ATP-dipendente della membrana interna mitocondriale appartenente al complesso proteasico m-AAA, che supporta il controllo qualità proteico, la maturazione proteolitica e il ricambio di substrati mal ripiegati associati alla membrana e alla matrice. La paraplegina contribuisce alla proteostasi mitocondriale, al mantenimento della catena respiratoria e alle risposte omeostatiche allo stress ossidativo e proteotossico, attraverso una sorveglianza coordinata della composizione proteica della membrana interna. L’alterazione di SPG7 compromette la funzione mitocondriale ed è associata a fenotipi neurodegenerativi, inclusa la paraplegia spastica ereditaria, rendendolo un bersaglio utile per studiare la vulnerabilità assonale e il mantenimento neuronale dipendente dall’energia. I modelli incentrati su SPG7 forniscono inoltre indicazioni sui pathway coinvolti nella dinamica mitocondriale, nelle risposte alle proteine mal ripiegate e nella segnalazione adattativa allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Paraplegin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPG7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPG7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPG7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Paraplegin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPG7 per lo studio della segnalazione di Paraplegin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPG7 critici per la funzione di Paraplegin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPG7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Paraplegin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Paraplegin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPG7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Paraplegin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Paraplegin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPG7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPG7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.