PAR-4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401719-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PAR-4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PAR-4 Double Nickase Plasmid (h) e il PAR-4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira F2RL3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PAR-4 Antibody (5F4): sc-293206
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PAR-4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401719-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PAR-4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401719-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F2RL3 codifica il recettore attivato da proteasi 4 (PAR-4), un GPCR responsivo alla trombina che viene attivato da una scissione proteolitica che espone un ligando “ancorato”, avviando la segnalazione tramite Gq/11 e G12/13. L’attivazione di PAR-4 promuove la mobilizzazione del calcio dipendente dalla fosfolipasi C, l’attivazione di PKC e il rimodellamento del citoscheletro mediato da RhoA, integrandosi con le vie MAPK/ERK per regolare l’attivazione piastrinica, la secrezione dei granuli e la stabilizzazione del trombo. Al di là dell’emostasi, l’attività di F2RL3/PAR-4 contribuisce alla segnalazione infiammatoria in contesti vascolari e immunitari ed è stata studiata nella biologia delle malattie cardiometaboliche e vascolari, inclusi processi legati all’aterosclerosi. La sua espressione e la dinamica di segnalazione offrono inoltre un punto di ingresso meccanicistico per studiare il crosstalk tra proteasi e GPCR e l’infiammazione legata alla coagulazione in modelli cellulari umani pertinenti.
PAR-4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus F2RL3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di F2RL3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di F2RL3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con F2RL3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.