PAR-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401719

Descripción general

F2RL3 codifica el receptor activado por proteasas 4 (PAR-4), un receptor acoplado a proteína G sensible a la trombina que traduce señales extracelulares de proteasas en movilización intracelular de calcio y cascadas de quinasas. PAR-4 se acopla a las vías Gq y G12/13 para regular la señalización de PLCβ, la remodelación del citoesqueleto dependiente de RhoA y los programas posteriores de MAPK y NF-κB que configuran los estados de activación celular. En plaquetas humanas y células asociadas al sistema vascular, PAR-4 contribuye a la señalización hemostática e inflamatoria e interactúa con vías ligadas a la coagulación que influyen en la adhesión celular y en las respuestas de barrera. La actividad alterada de F2RL3/PAR-4 se ha investigado en contextos como la biología relacionada con la trombosis, la inflamación vascular y la señalización asociada al microambiente tumoral, donde las señales de proteasas modulan la proliferación y la motilidad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen F2RL3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del F2RL3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de F2RL3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAR-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en F2RL3 para la investigación de la señalización de PAR-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de F2RL3 críticos para la función de PAR-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de F2RL3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAR-4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PAR-4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus F2RL3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAR-4 (h) y el plásmido HDR PAR-4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología F2RL3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana F2RL3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.