PAR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420266

概要

マウスのF2rl2は、細胞外プロテアーゼシグナルや凝固に関連する刺激によって活性化されるGPCRファミリーの一員であるプロテアーゼ活性化受容体3（PAR-3）をコードします。PAR-3は、ヘテロ三量体Gタンパク質シグナル伝達を動員し得るプロテアーゼ活性化受容体ネットワークに関与し、応答性の細胞種においてカルシウムフラックス、MAPK応答、細胞骨格リモデリングに影響する下流経路を協調的に制御します。マウス系では、F2rl2は血管および炎症生物学、血小板関連シグナル伝達、ならびに組織微小環境における間質—免疫コミュニケーションでの役割に関して研究されています。プロテアーゼ受容体シグナルの破綻は、血栓症、炎症、がん生物学のモデルにおいて重要であり、受容体発現やシグナル強度の変化が細胞移動やバリア関連プロセスを再編成し得ます。

PAR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるF2rl2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、F2rl2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、F2rl2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAR-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAR-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、F2rl2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAR-3の機能に不可欠なF2rl2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、F2rl2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、F2rl2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAR-3 HDRプラスミド（m）および PAR-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはF2rl2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のF2rl2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。