PAR-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420266

Übersicht

Das Mausgen **F2rl2** kodiert den proteaseaktivierten Rezeptor 3 (**PAR-3**), ein Mitglied der GPCR-Familie, das im Kontext extrazellulärer Proteasesignale und gerinnungsassoziierter Reize aktiviert wird. PAR-3 ist Teil von Netzwerken proteaseaktivierter Rezeptoren, die heterotrimere G‑Protein-Signalwege einbinden und nachgeschaltete Pfade koordinieren können, welche den Kalziumfluss, MAPK-Antworten und die Umgestaltung des Zytoskeletts in responsiven Zelltypen beeinflussen. In murinen Systemen wird **F2rl2** hinsichtlich seiner Rollen in der vaskulären und inflammatorischen Biologie, in thrombozytenassoziierter Signalübertragung sowie in der Kommunikation zwischen Stroma und Immunsystem innerhalb von Gewebemikroumgebungen untersucht. Eine dysregulierte Protease-Rezeptor-Signalgebung ist relevant für Modelle von Thrombose, Entzündung und Krebsbiologie, in denen veränderte Rezeptorexpression oder Signalintensität Zellmigration und barrierebezogene Prozesse umgestalten kann.

Das PAR-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des F2rl2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des F2rl2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von F2rl2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAR-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von F2rl2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAR-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf F2rl2-Exone abzielen, die für die PAR-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere F2rl2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAR-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PAR-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des F2rl2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAR-3 HDR-Plasmid (m) und PAR-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von F2rl2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten F2rl2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.