Plasmide CRISPR d'Activation (m) Pannexin-1: sc-424967-ACT

Le gène murin Panx1 code la pannexine‑1, un canal à large pore de la membrane plasmique qui assure la libération d’ATP et la signalisation purinergique afin de coordonner la communication intercellulaire. L’activité de la pannexine‑1 influence les flux de Ca2+, les réponses liées à l’inflammasome et la modulation de la signalisation de l’immunité innée, en interaction fréquente avec les voies des récepteurs P2X/P2Y et les mécanismes d’ouverture/fermeture des canaux pannexine. Dans divers types cellulaires, PANX1 contribue à la régulation des signaux apoptotiques de type « find‑me », des réponses mécanoréceptrices et de la libération de médiateurs inflammatoires. Une dérégulation de la signalisation de PANX1 a été associée dans la littérature à la neuroinflammation, aux réponses aux lésions ischémiques et à des altérations de la signalisation au sein du microenvironnement tumoral–immunitaire, ce qui justifie son étude dans des modèles pertinents pour la maladie sans pour autant suggérer une utilité clinique.

Pannexin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Panx1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pannexin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Panx1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Panx1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pannexin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Panx1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pannexin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pannexin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Panx1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.