PAK5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404073-LAC

PAK5 (p21-aktivierte Kinase 5; PAK7) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die als nachgeschalteter Effektor von GTPasen der Rho-Familie fungiert und die RAC1/CDC42-Signalgebung mit dem Umbau des Zytoskeletts, der Zellpolarität und stressresponsiven Signalwegen verknüpft. Es reguliert die Aktin-Dynamik sowie mikrotubuliassoziierte Prozesse, die das Neuritenauswachsen, den Vesikeltransport und Überlebenssignale beeinflussen, und es wurden kontextabhängige Zusammenhänge mit der Aktivität von MAPK- sowie PI3K/AKT-Netzwerken beschrieben. Eine dysregulierte PAK5-Expression oder -Signalgebung wurde mit veränderter Zellbeweglichkeit und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht und in der Neurobiologie sowie in krebsrelevanten Signalprogrammen untersucht. Diese Eigenschaften machen PAK5 zu einem nützlichen Ziel, um kinasegetriebenen Umbau der zellulären Architektur und transkriptionelle Antworten in humanen Modellsystemen zu untersuchen.

PAK5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PAK5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PAK5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PAK5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PAK5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PAK5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.