Plásmido CRISPR de Activación (m) PADI2: sc-422175-ACT

El gen murino **Padi2** codifica la peptidilarginina deiminasa 2 (PADI2), una enzima dependiente de calcio que cataliza la citrulinación de proteínas, convirtiendo residuos de arginina en citrulina y alterando la carga, la estructura y las redes de interacción de las proteínas. La actividad de PADI2 modula la cromatina y los programas transcripcionales mediante la citrulinación de histonas y otros sustratos nucleares, y también influye en la función de proteínas del citoesqueleto y extracelulares en contextos de diferenciación y señalización inflamatoria. La citrulinación desregulada se ha vinculado con la generación de autoantígenos y una activación inmunitaria aberrante, y PADI2 se estudia con frecuencia en vías que conectan la inmunidad innata, la regulación epigenética y las respuestas al estrés celular. En modelos murinos, la perturbación de **Padi2** se utiliza para investigar la polarización de células inmunitarias, la remodelación epitelial y los mecanismos que acoplan las modificaciones postraduccionales al estado regulatorio de los genes.

PADI2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Padi2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PADI2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Padi2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Padi2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PADI2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Padi2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PADI2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PADI2 en células tumorales con expresión de Padi2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.