Plasmide Double Nickase (m2) p73: sc-423511-NIC-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m2) p73 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p73 Double Nickase (m2) et le plasmide p73 Double Nickase (m22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Trp73. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p73 Antibody (5B429): sc-56191
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m2) p73 | sc-423511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Trp73 code p73, un facteur de transcription de la famille p53 qui régule des programmes contrôlant l’arrêt du cycle cellulaire, l’apoptose et la stabilité génomique via l’activation dépendante du contexte de gènes cibles impliqués dans les réponses aux dommages de l’ADN. p73 contribue également à des processus développementaux, notamment la neurogenèse et la différenciation épithéliale, et s’interface avec des réseaux de signalisation tels que la transcription induite par E2F, la régulation associée au TGF-β et les voies des kinases activées par le stress. La dérégulation de l’équilibre des isoformes de Trp73 et de la transcription médiée par p73 a été associée à une altération des fonctions de suppresseur de tumeur, à une instabilité chromosomique et à des défauts d’homéostasie tissulaire pertinents pour la biologie des cancers et certains phénotypes développementaux. L’édition génomique de Trp73 dans des modèles murins étaye des études mécanistiques de la fonction spécifique des isoformes, des circuits transcriptionnels et des interactions entre voies de signalisation sous-tendant les réponses au stress et des états cellulaires associés aux maladies.
p73 Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Trp73 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Trp73. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Trp73. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Trp73.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.