p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402401

Übersicht

DDX5 kodiert die p68‑RNA‑Helikase, eine ATP‑abhängige DEAD‑Box‑RNA‑Helikase, die RNA sowie Ribonukleoprotein‑Komplexe umstrukturiert und dadurch das prä‑mRNA‑Spleißen, die Ribosomenbiogenese und die mikroRNA‑Prozessierung steuert. p68 wirkt außerdem als transkriptioneller Ko‑Regulator, indem es mit signalantwortenden Transkriptionsfaktoren interagiert und so den RNA‑Stoffwechsel mit Genexpressionsprogrammen verknüpft, die den Zellzyklus und Stressantworten regulieren. Über diese Funktionen trägt DDX5 zur Aufrechterhaltung der Genomintegrität bei und koordiniert DNA‑Schadensantworten mit der RNA‑Verarbeitung. Eine fehlregulierte DDX5‑Expression oder ‑Funktion wurde in mehreren Tumorkontexten mit onkogenen transkriptionellen Netzwerken und veränderten RNA‑Spleißlandschaften in Verbindung gebracht, was DDX5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien RNA‑getriebener Krankheitsphänotypen macht.

Das p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DDX5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DDX5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DDX5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p68 RNA Helicase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DDX5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p68 RNA Helicase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DDX5-Exone abzielen, die für die p68 RNA Helicase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DDX5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DDX5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p68 RNA Helicase HDR-Plasmid (h) und p68 RNA Helicase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DDX5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DDX5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.