p68 RNA Helicase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402401

Panoramica

DDX5 codifica per l’elicasi dell’RNA p68, un’elicasi dell’RNA ATP-dipendente della famiglia DEAD-box che rimodella l’RNA e i complessi ribonucleoproteici per controllare lo splicing del pre‑mRNA, la biogenesi dei ribosomi e la maturazione dei microRNA. p68 agisce anche come co-regolatore trascrizionale interfacciandosi con fattori di trascrizione sensibili ai segnali, collegando il metabolismo dell’RNA ai programmi di espressione genica che governano la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress. Attraverso queste attività, DDX5 contribuisce al mantenimento dell’integrità del genoma e al coordinamento delle risposte al danno al DNA con l’elaborazione dell’RNA. Un’espressione o una funzione deregolata di DDX5 è stata associata a reti trascrizionali oncogeniche e a profili di splicing dell’RNA alterati in diversi contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dei fenotipi di malattia guidati dall’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p68 RNA Helicase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DDX5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DDX5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DDX5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p68 RNA Helicase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DDX5 per lo studio della segnalazione di p68 RNA Helicase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DDX5 critici per la funzione di p68 RNA Helicase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DDX5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DDX5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal p68 RNA Helicase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR p68 RNA Helicase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DDX5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DDX5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.