P5CRL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406033

Übersicht

PYCRL kodiert ein pyrrolin-5-carboxylat-reduktaseähnliches Protein (P5CRL), ein Mitglied der NAD(P)H-abhängigen Reduktasefamilie, das am Redoxstoffwechsel von Prolin und verwandten Aminosäuren beteiligt ist. Prolinbiosynthese und -umsatz beeinflussen das zelluläre Redoxgleichgewicht, die NADP(H)-Homöostase und die mitochondrienassoziierte metabolische Anpassung und verknüpfen PYCRL damit mit umfassenderen Prozessen wie oxidativen Stressantworten und der Kontrolle biosynthetischer Flüsse. Störungen von Enzymen des Prolinwegs können die Proliferation, das Remodelling der extrazellulären Matrix über kollagenbezogene Anforderungen sowie die Toleranz gegenüber Nährstoffstress beeinflussen. Entsprechend ist PYCRL für die Untersuchung metabolischer Umprogrammierung in krankheitsrelevanten Kontexten interessant, in denen Redox- und Aminosäurestoffwechsel verändert sind, darunter die Krebsbiologie und angeborene Stoffwechselstörungen.

Das P5CRL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PYCRL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PYCRL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PYCRL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P5CRL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PYCRL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P5CRL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PYCRL-Exone abzielen, die für die P5CRL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PYCRL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P5CRL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P5CRL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PYCRL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P5CRL HDR-Plasmid (h) und P5CRL HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PYCRL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PYCRL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.