p57 Kip2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400444-NIC

CDKN1C codifica l'inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti p57 Kip2, un importante regolatore negativo della progressione G1/S che limita l'attività delle CDK per favorire l'uscita dal ciclo cellulare e sostenere la differenziazione. In quanto gene imprintato espresso prevalentemente dall'allele materno, CDKN1C contribuisce a coordinare i programmi di crescita dello sviluppo e l'omeostasi dei tessuti, intersecandosi con vie che regolano proliferazione, apoptosi e impegno di linea. Alterazioni dell'espressione o della funzione di CDKN1C sono associate a un controllo della crescita deregolato e sono state implicate in fenotipi di iperaccrescimento dello sviluppo e nella biologia tumorale, rendendolo un nodo utile per lo studio dei checkpoint del ciclo cellulare. Nelle cellule umane, p57 Kip2 è inoltre collegato a stati simili alla senescenza e a risposte dipendenti dal contesto ai segnali mitogenici e allo stress.

p57 Kip2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDKN1C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDKN1C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDKN1C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDKN1C interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.