Plasmide Double Nickase (h) p57 Kip2: sc-400444-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) p57 Kip2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p57 Kip2 Double Nickase (h) et le plasmide p57 Kip2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDKN1C. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p57 Kip2 Antibody (KP39): sc-56341
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) p57 Kip2 | sc-400444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) p57 Kip2 | sc-400444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN1C code l’inhibiteur de kinase dépendante des cyclines p57 Kip2, un régulateur négatif majeur de la transition G1/S qui freine l’activité des CDK afin d’imposer la sortie du cycle cellulaire et de soutenir la différenciation. En tant que gène soumis à empreinte, exprimé majoritairement à partir de l’allèle maternel, CDKN1C contribue à coordonner les programmes de croissance au cours du développement et l’homéostasie tissulaire, en s’articulant avec des voies qui gouvernent la prolifération, l’apoptose et l’engagement de lignée. Une expression ou une fonction altérée de CDKN1C est associée à une dérégulation du contrôle de la croissance et a été impliquée dans des phénotypes de surcroissance développementale ainsi que dans la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des points de contrôle du cycle cellulaire. Dans les cellules humaines, p57 Kip2 est également lié à des états de type sénescence et à des réponses dépendantes du contexte aux signaux mitogènes et au stress.
p57 Kip2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN1C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN1C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN1C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN1C.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.