Partículas Lentivirales de Activación (m) p53: sc-423509-LAC

El gen Trp53 de ratón codifica el factor de transcripción p53, un regulador central de las respuestas celulares al estrés que coordina la señalización del daño en el ADN, la detención del ciclo celular, la senescencia y la apoptosis. p53 integra señales de las vías ATM/ATR–CHK y está modulado por el eje MDM2 para mantener la estabilidad genómica mediante el control transcripcional de dianas implicadas en la reparación, el metabolismo y la homeostasis redox. La alteración o atenuación de la función de Trp53 se asocia estrechamente con la transformación oncogénica y con respuestas modificadas al estrés genotóxico, lo que convierte a p53 en un nodo clave en las redes supresoras de tumores. En modelos murinos, Trp53 se utiliza ampliamente para investigar mecanismos de inicio del cáncer, vías de resistencia a terapias y el mantenimiento del genoma en distintos tejidos.

Las partículas de activación lentiviral p53 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Trp53 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral p53 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Trp53, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de p53. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Trp53 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.