p47phox Plasmide Double Nickase (h): sc-417916-NIC

NCF1 codifica p47phox, una subunità citosolica di organizzazione del complesso NADPH ossidasi dei fagociti (NOX2), che regola l’assemblaggio dipendente dallo stimolo delle componenti di membrana e citosoliche per generare specie reattive dell’ossigeno (ROS). La fosforilazione di p47phox e la sua traslocazione alla membrana contribuiscono a coordinare il trasferimento di elettroni dal NADPH all’ossigeno, sostenendo la risposta di burst ossidativo, la segnalazione redox e l’uccisione microbica nelle cellule mieloidi. Un’alterazione della funzione di NCF1 perturba l’omeostasi dei ROS ed è associata a fenotipi di immunodeficienza e a disregolazione infiammatoria, inclusa una suscettibilità a quadri simili alla malattia granulomatosa cronica. Inoltre, varianti di NCF1 sono state collegate a vie autoimmuni e autoinfiammatorie, rendendo p47phox un nodo utile per lo studio della segnalazione dell’immunità innata e della regolazione dipendente dal redox.

p47phox Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NCF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NCF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NCF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NCF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.