Plasmide Double Nickase (h) p47phox: sc-417916-NIC

NCF1 code pour p47phox, une sous-unité organisatrice cytosolique du complexe NADPH oxydase des phagocytes (NOX2), qui régule l’assemblage, dépendant du stimulus, des composants membranaires et cytosoliques afin de produire des espèces réactives de l’oxygène (ROS). La phosphorylation de p47phox et sa translocation vers la membrane contribuent à coordonner le transfert d’électrons du NADPH vers l’oxygène, soutenant les réponses de bouffée oxydative, la signalisation redox et l’élimination des microbes dans les cellules myéloïdes. Une fonction altérée de NCF1 perturbe l’homéostasie des ROS et est associée à des phénotypes d’immunodéficience et à une dérégulation inflammatoire, notamment une susceptibilité à des présentations de type maladie granulomateuse chronique. De plus, des variations de NCF1 ont été associées à des voies auto-immunes et autoinflammatoires, faisant de p47phox un nœud utile pour étudier la signalisation de l’immunité innée et la régulation dépendante du redox.

p47phox Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NCF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NCF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NCF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NCF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.