Plasmide CRISPR d'Activation (h) p38 alpha MAPK14: sc-400057-ACT

MAPK14 code pour p38 alpha, une kinase protéique activée par le stress de la famille des MAP kinases, qui intègre des signaux provenant des cytokines, du stress osmotique, de l’irradiation UV et de stimuli associés aux agents pathogènes afin de réguler la transcription, la stabilité des ARNm et la traduction des protéines. p38 alpha (MAPK14) agit au sein de la cascade MAPK en aval de MKK3/MKK6 et module des effecteurs tels qu’ATF2, ELK1, MAPKAPK2/3 et HSP27, façonnant la signalisation inflammatoire, le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et l’apoptose. Il constitue un nœud clé des voies de l’immunité innée et de l’inflammation, notamment les voies TNF, IL-1 et TLR, et influence les interactions avec NF-κB et les programmes de réponse à l’interféron. Une activité dérégulée de MAPK14 a été impliquée dans l’inflammation chronique, les réponses au stress neurodégénératives, le remodelage cardiovasculaire et de multiples phénotypes associés au cancer, ce qui en fait une cible largement étudiée pour la cartographie des voies et la génomique fonctionnelle.

p38 alpha MAPK14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p38 alpha MAPK14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p38 alpha MAPK14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p38 alpha MAPK14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p38 alpha MAPK14 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.