p35 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400431

Übersicht

CDK5R1 kodiert p35, eine in Neuronen stark angereicherte regulatorische Untereinheit, die an die cyclinabhängige Kinase 5 (CDK5) bindet und sie aktiviert, um die räumlich-zeitliche Kinaseaktivität an Membranen und innerhalb von Neuriten zu steuern. Der CDK5–p35-Komplex koordiniert neuronale Migration, Axonführung, Synaptogenese und aktivitätsabhängige synaptische Plastizität durch die Phosphorylierung von Zytoskelett- und Signalproteinen und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die die Dynamik von Mikrotubuli und Aktin regulieren. Eine gestörte p35-Umsetzung und die Umwandlung zu p25 können die CDK5-Aktivität verlängern und die Proteostase beeinträchtigen, was zu Mechanismen beiträgt, die bei Neurodegeneration und exzitotoxischem Stress untersucht werden. Eine veränderte CDK5R1-Expression oder CDK5–p35-Signalgebung wurde außerdem in Zusammenhängen wie Epilepsie, neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und neuronalen Verletzungsreaktionen untersucht.

Das p35 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDK5R1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDK5R1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDK5R1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p35-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDK5R1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p35-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDK5R1-Exone abzielen, die für die p35-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDK5R1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p35 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom p35 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDK5R1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p35 HDR-Plasmid (h) und p35 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDK5R1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDK5R1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.