P2Y12 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417999

Descripción general

P2RY12 codifica el receptor purinérgico P2Y12, un GPCR acoplado a Gi que detecta el ADP extracelular para suprimir la señalización de AMPc y coordinar la activación y agregación plaquetaria, así como la estabilización del trombo, a través de la señalización downstream de PI3K/AKT e integrinas. Más allá de la hemostasia, P2Y12 es un marcador característico de la microglía homeostática y modula la quimiotaxis, la motilidad de las prolongaciones y la vigilancia neuroinmunitaria en respuesta a nucleótidos. Las alteraciones en la actividad o expresión de P2RY12 se han vinculado con una reactividad plaquetaria anómala y con cambios en el estado microglial observados en contextos neuroinflamatorios y neurodegenerativos. Estas características hacen de P2RY12 una diana útil para desentrañar la señalización impulsada por nucleótidos, la comunicación célula–célula y el crosstalk inmuno-vascular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P2Y12 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P2RY12 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P2RY12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P2RY12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P2Y12.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P2RY12 para la investigación de la señalización de P2Y12, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de P2RY12 críticos para la función de P2Y12
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P2RY12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P2Y12 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P2Y12 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P2RY12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P2Y12 (h) y el plásmido HDR P2Y12 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P2RY12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P2RY12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.