Plásmido CRISPR de Activación (h) P2X6: sc-416264-ACT

El gen humano **P2RX6** codifica la subunidad **P2X6** de los canales iónicos **P2X** activados por ATP, que median una rápida entrada de cationes en respuesta a nucleótidos extracelulares. P2X6 puede contribuir a ensamblajes heteroméricos de canales que modulan la señalización dependiente de Ca2+, la excitabilidad de la membrana y programas transcripcionales posteriores vinculados a la neurotransmisión purinérgica y la modulación inmunitaria. A través de redes de señalización purinérgica, la actividad asociada a P2X6 puede influir en procesos como la homeostasis del calcio, la liberación vesicular y la integración de señales inflamatorias. La detección desregulada de ATP extracelular y la señalización purinérgica ionotrópica se han implicado en la fisiopatología neuroinflamatoria y cardiovascular, lo que impulsa estudios mecanísticos de la regulación de P2RX6 en tipos celulares relevantes.

P2X6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de P2RX6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

P2X6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus P2RX6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional P2RX6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de P2X6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo P2RX6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de P2X6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía P2X6 en células tumorales con expresión de P2RX6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.